产品概述

产品描述

DH10Bac菌株是一种可以用于生产杆状病毒蛋白表达系统所需的大分子质粒DNA的克隆化学感受态细胞。DH10Bac菌株自身带有两个质粒：携带杆状病毒基因组的穿梭载体bMON14272和辅助质粒pMON7124。后者介导bMON14272中的杆状病毒基因组和即将外源转入的表达载体(第三个质粒)之间的位点特异性重组，产生的大分子质粒DNA同时含有病毒基因组和表达重组蛋白的基因，并能在DH10Bac菌株中高效扩增。DH10Bac菌株bMON14272包含mini-F复制子、卡那霉素抗性基因、attTn7位点和lacZα互补因子；辅助质粒pMON7124包含四环素抗性和tnsABCD区域，该区域表达转座反应所需的转座蛋白。携带T7转座原件(Tn7 element)的外源转入的表达载体(通常为pFastBac，带有庆大霉素抗性基因)，因此可在卡那霉素、四环素和庆大霉素抗性的平板筛选阳性克隆。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取；ϕ80lacZΔM15的存在使DH10Bac可用于蓝白斑筛选；mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10Bac菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。经pUC19质粒转化检测，DH10Bac感受态细胞的转化效率可达108 cfu/μg DNA。

产品优势

✽ 高转化效率：>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 适合于生产杆状病毒蛋白表达系统所需的大分子质粒DNA

产品组分

基因型：F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara-leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG /pMON14272 / pMON7124

产品应用

DH10Bac菌株适合于生产杆状病毒蛋白表达系统所需的大分子质粒DNA。

实验流程

1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。

3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。

保存条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

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