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类别:生物试剂
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产品概述产品描述Rosetta系列菌株来源于BL21系列宿主菌,该系列菌株含有原本在大肠杆菌中稀少的真核细胞密码子,增加了真核细胞的蛋白表达水平。Rosetta(DE3) pLysS来源于Rosetta(DE3),菌株含有pRARE质粒,能够提供···
产品概述
产品描述
Rosetta系列菌株来源于BL21系列宿主菌,该系列菌株含有原本在大肠杆菌中稀少的真核细胞密码子,增加了真核细胞的蛋白表达水平。Rosetta(DE3) pLysS来源于Rosetta(DE3),菌株含有pRARE质粒,能够提供AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA稀有密码子的tRNA,使得该宿主菌相对于其他大肠杆菌,能够提供更加“通用”的蛋白质表达,从而提升目的蛋白表达水平。DE3是溶源性的λDE3,所以带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体,及其他T7启动子系列载体。此外,pLysSRARE质粒能够表达T7溶菌酶,从而有效降低目的基因的基础表达水平。该质粒具有氯霉素抗性。pLysSRARE质粒的起始复制位点是p15 Origin,这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。经pUC19质粒转化检测,Rosetta(DE3) pLysS感受态细胞的转化效率可达107 cfu/μg DNA以上。
产品优势
✽ 高转化效率:>1×107 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 大大提高外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的表达水平
✽ 降低目的基因的本底水平表达
产品组分
组分 | CC96112-01 | CC96112-02 |
Rosetta(DE3) pLysS化学感受态 | 10×100 μL | 100×100 μL |
基因型:F- ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)* pLysSRARE (CamR)
产品应用
Rosetta(DE3) pLysS感受态细胞适用于外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的T7表达。
实验流程
1. 解冻感受态细胞:从-80℃取感受态细胞,放置在冰浴或冰水浴中融化,约5-10 min,放置时间过长会影响转化效率。
2. DNA样品的转化:每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL,然后轻轻弹击管底约2-3次,立即冰上静置孵育30 min。
✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作,避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。
3. 热激处理:将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。
✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。
4. 复苏培养:加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基,颠倒数次混匀,37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。
5. 收菌涂板:如果用于质粒的转化扩增,建议直接取50-100 μL进行涂板即可;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议先5000 g,1 min室温离心沉淀细菌,吸除约900-950 μL上清,然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬,涂布到含相应抗生素的LB平板上。
6. 过夜培养:将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍,有利于形成单克隆。
保存条件
-80℃保存;请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。
相关参数
感受态类型 | 化学感受态 |
感受态菌株名称 | Rosetta(DE3) pLysS |
种属 | 大肠杆菌 |
转化效率 | 高效率 (>1x10^7 cfu/µg pUC19 DNA) |
菌株用途 | 表达 |
应用特征 | 适用于外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的T7表达 |
是否可进行蓝白斑筛选 | 否 |
菌株抗性 | 氯霉素 |
培养基 | LB |
培养条件 | 37℃,有氧 |
诱导方法 | - |
保存条件 | -80℃ |
运输条件 | 干冰 |
包装规格 | 管装 (100 µL/管) |
出品公司 | ToloBio |
常见问题解答