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表达大肠杆菌感受态Rosetta 2(DE3)pLacI

类别:生物试剂

浏览:88

产品概述产品描述Rosetta 2(DE3) pLacI来源于Rosetta(DE3),本菌株含有pLacIRARE2质粒,除了能够提供原Rosetta(DE3)宿主菌含有的AUA,AGG,AGA,CUA,CCC和GGA六个稀有密码子的tRNA外,还提供了第七个稀有密码子CGG的···

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产品概述

产品描述

Rosetta 2(DE3) pLacI来源于Rosetta(DE3),本菌株含有pLacIRARE2质粒,除了能够提供原Rosetta(DE3)宿主菌含有的AUA,AGG,AGA,CUA,CCC和GGA六个稀有密码子的tRNA外,还提供了第七个稀有密码子CGG的tRNA,因此该宿主菌相对于其他大肠杆菌,能够提供更加“通用”的蛋白质表达能力。该菌株可表达T7 RNA聚合酶,故而适用于pET系列载体及其他T7启动子系列载体。该菌株含有pLacIRARE2质粒,具有氯霉素抗性,能够额外表达lac转录抑制蛋白,可抑制目的蛋白的本底表达水平。此外,pLacIRARE2质粒的起始复制位点是p15 Origin,这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。经pUC19质粒转化检测,Rosetta 2(DE3) pLacI感受态细胞的转化效率可达107 cfu/μg DNA以上。

 

产品优势

✽ 高转化效率:>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 大大提高外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的表达水平
✽ 降低目的基因的本底水平表达

 

产品组分

组分

CC96113-01

CC96113-02

Rosetta 2(DE3) pLacI感受态细胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL




基因型:F-ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)* pLacIRARE (CamR)

 

产品应用

Rosetta 2(DE3) pLacI感受态细胞适用于外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的T7表达。

 

实验流程

1. 解冻感受态细胞:从-80℃取感受态细胞,放置在冰浴或冰水浴中融化,约5-10 min,放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化:每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL,然后轻轻弹击管底约2-3次,立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作,避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。

3. 热激处理:将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养:加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基,颠倒数次混匀,37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板:如果用于质粒的转化扩增,建议直接取50-100 μL进行涂板即可;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议先5000 g,1 min室温离心沉淀细菌,吸除约900-950 μL上清,然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬,涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养:将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍,有利于形成单克隆。

 

保存条件

-80℃保存;请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

 

相关参数

感受态类型

化学感受态

感受态菌株名称

Rosetta(DE3) pLacI

种属

大肠杆菌

转化效率

高效率 (>1x10^7 cfu/µg pUC19 DNA)

菌株用途

表达

应用特征

适用于外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的T7表达

是否可进行蓝白斑筛选

菌株抗性

氯霉素

培养基

LB

培养条件

37℃,有氧

诱导方法

-

保存条件

-80℃

运输条件

干冰

包装规格

管装 (100 µL/管)

出品公司

ToloBio



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