产品概述

产品描述

Rosetta 2(DE3) pLacI来源于Rosetta(DE3)，本菌株含有pLacIRARE2质粒，除了能够提供原Rosetta(DE3)宿主菌含有的AUA，AGG，AGA，CUA，CCC和GGA六个稀有密码子的tRNA外，还提供了第七个稀有密码子CGG的tRNA，因此该宿主菌相对于其他大肠杆菌，能够提供更加“通用”的蛋白质表达能力。该菌株可表达T7 RNA聚合酶，故而适用于pET系列载体及其他T7启动子系列载体。该菌株含有pLacIRARE2质粒，具有氯霉素抗性，能够额外表达lac转录抑制蛋白，可抑制目的蛋白的本底表达水平。此外，pLacIRARE2质粒的起始复制位点是p15 Origin，这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。经pUC19质粒转化检测，Rosetta 2(DE3) pLacI感受态细胞的转化效率可达107 cfu/μg DNA以上。

产品优势

✽ 高转化效率：>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 大大提高外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的表达水平
✽ 降低目的基因的本底水平表达

产品组分

基因型：F-ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)* pLacIRARE (CamR)

产品应用

Rosetta 2(DE3) pLacI感受态细胞适用于外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的T7表达。

实验流程

1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。

3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。

保存条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

相关参数

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