产品概述

产品描述

Rosetta(DE3)是在大肠杆菌BL21(DE3)基础上携带额外质粒所得衍生菌株。该质粒含有一个氯霉素抗性基因且可转录产生识别6种大肠杆菌的稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)的tRNA(这些tRNA是由它们天然的启动子驱动转录的)，因此Rosetta(DE3)能够大大提高外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的表达水平。同时，Rosetta(DE3)的染色体上整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，受到lacUV5启动子控制，外源添加IPTG可以诱导该菌株中T7 RNA聚合酶的快速表达。T7 RNA聚合酶进而识别表达质粒载体上的的T7启动子(例如pET系列，pGEX，pMAL等质粒)，从而驱动重组蛋白的高效表达。经pUC19质粒转化检测，Rosetta(DE3)感受态细胞的转化效率可达107 cfu/μg DNA。

产品优势

✽ 高转化效率：>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 大大提高外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的表达水平

产品组分

基因型：F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3) pRARE (CamR)

产品应用

Rosetta(DE3)感受态细胞适用于外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的T7表达。

实验流程

1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。

3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。

保存条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

相关参数

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