产品概述

产品描述

DH5α感受态细胞是一种可以用于常规质粒高效转化的质粒克隆化学感受态细胞，是实验室最为常用的大肠杆菌菌株之一，广泛用于基因克隆，蓝白筛选，质粒稳定扩增等分子生物学实验。该菌株缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA) 减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；lacZΔM15是表达β -半乳糖苷酶α片段的一段基因，当M15缺失(△M15)时，lacZ基因虽然能表达ω片段，但不能表达α片段，β -半乳糖苷酶没有活性。当带有lacZ(α片段)基因的lac操纵子通过载体DNA(如pUC19)转化到lacZ△M15基因型的感受态(如DH5α)时，在有IPTG (异丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷) 存在的情况下，IPTG作为乳糖的类似物与lacI阻遏蛋白结合而使lac操纵子不被抑制，从而利用α-互补性产生完整的β -半乳糖苷酶，β -半乳糖苷酶可分解底物X-gal (半乳糖类似物)，使其呈现蓝色。因此，DH5α感受态可用于蓝、白斑筛选。使用pUC19质粒进行热激活转化，转化效率可以高达1×108 cfu/μg DNA以上。

产品优势

✽ 高转化效率：>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 适合于常规质粒高效转化和稳定保存

产品组分

基因型：F- φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF) U169 recA1 endA1 hsdR17(rk- mk+) phoA supE44 thi-1 gyrA96 relA1 λ-*

产品应用

DH5α菌株适合于常规质粒的高效转化。

实验流程

1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。

3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。

保存条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

相关参数

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