产品概述

产品描述

JM110菌株由于甲基化酶基因Dam和Dcm的缺失，使得在该宿主菌中扩增的质粒DNA或噬菌体DNA(phagemid DNA)没有发生相应的甲基化修饰，因而能被某些对相应甲基化修饰敏感的限制性内切酶酶切。Dam甲基化酶识别DNA序列GATC上的腺嘌呤残基并使其N-6位点上发生甲基化，而Dcm甲基化酶识别DNA序列CCAGG和CCTGG上的胞嘧啶残基并使其C-5位点上发生甲基化。JM110菌株具有链霉素抗性(StrR)；该菌株携带的lacIqlacZΔM15突变使其可以进行蓝白斑筛选。但由于该菌株的转化效率不太高，一般不用于质粒构建的宿主，而是用于质粒转化以便进行质粒去甲基化。经pUC19质粒转化检测，JM110感受态细胞的转化效率可达107 cfu/μg DNA。

产品优势

✽ 高转化效率：>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 适合于进行质粒去甲基化

产品组分

基因型：rpsL (StrR) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB)/F′ [traD36 proAB lacIq lacZΔM15]

产品应用

JM110菌株适合于质粒去甲基化。

实验流程

1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。

3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。

保存条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

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