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克隆大肠杆菌感受态BW25113

类别:生物试剂

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产品概述产品描述BW25113菌株来源于E. coliK12 W1485,是K12的衍生菌株,与MG1655类似,也是一种经过较少改造,比较接近于“野生型”的大肠杆菌工程菌株。BW25113作为母系菌株,可以用来制作E. coliKeio Knockout文库···

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产品概述

产品描述

BW25113菌株来源于E. coli K12 W1485,是K12的衍生菌株,与MG1655类似,也是一种经过较少改造,比较接近于“野生型”的大肠杆菌工程菌株。BW25113作为母系菌株,可以用来制作E. coli Keio Knockout文库;同时可作为大肠杆菌模式菌株使用,用来制作各种基因的Knockout突变体。另外,BW25113可用于构建、扩增质粒使用,但是不含核酸酶endA1突变,因此体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶,以防提取的质粒被降解。BW25113感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。

 

产品优势

✽ 高转化效率:>1x108 cfu/µg pUC19 DNA

 

产品组分

组分

CC96147-01

CC96147-02

BW25113化学感受态

10 × 100 μL

100 × 100 μL




基因型:F- DE(araD-araB)567 lacZ4787(del)::rrnB-3 LAM- rph-1 DE(rhaD-rhaB)568 hsdR514

 

产品应用

BW25113适合于质粒克隆。

 

实验流程

1. 解冻感受态细胞:从-80℃取感受态细胞,放置在冰浴或冰水浴中融化,约5-10 min,放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化:每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL,然后轻轻弹击管底约2-3次,立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作,避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。

3. 热激处理:将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养:加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基,颠倒数次混匀,37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板:如果用于质粒的转化扩增,建议直接取50-100 μL进行涂板即可;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议先5000 g,1 min室温离心沉淀细菌,吸除约900-950 μL上清,然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬,涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养:将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍,有利于形成单克隆。

 

保存条件

-80℃保存;请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

 

相关参数

感受态类型

化学感受态

感受态菌株名称

BW25113

种属

大肠杆菌

转化效率

高效率 (>1x10^8 cfu/µg pUC19 DNA)

菌株用途

克隆

应用特征

适合于质粒克隆

是否可克隆甲基化DNA

是否可进行蓝白斑筛选

菌株抗性

-

培养基

LB

培养条件

37℃,有氧

诱导方法

-

保存条件

-80℃

运输条件

干冰

包装规格

管装 (100 µL/管)

出品公司

ToloBio



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