产品概述

产品描述

EPI300菌株含有一个突变的trfA基因，该基因表达出的蛋白产物可以促进含有oriV复制子的质粒的高拷贝复制。在非诱导情况下，当含有oriV复制子质粒的EPI300菌株在LB/2YT或SOB培养基中生长时，trfA基因的表达被抑制，oriV复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平；当在培养基中加入诱导剂CopyMore 300 (#96001)时，oriV复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平，提高了质粒产量。[mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(例如：哺乳动物基因组DNA)。recA1和 endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。因此，EPI300菌株特别适合于各种不稳定DNA或在常规菌株中得率偏低的质粒克隆。经pUC19质粒转化检测，EPI300感受态细胞的转化效率可达108 cfu/μg DNA。

产品优势

✽ 高转化效率：>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 适合于各种不稳定DNA或在常规菌株中得率偏低的质粒克隆

产品组分

基因型：F– mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galU galK λ– rpsL nupG trfA dhfr

产品应用

EPI300菌株适合于各种不稳定DNA或在常规菌株中得率偏低的质粒克隆。

实验流程

1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。

3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。

保存条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

相关参数

 常见问题解答