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克隆大肠杆菌感受态GT115

类别:生物试剂

浏览:73

产品概述产品描述GT115感受态是一种专门用来克隆含有发夹结构(Hairpin)或重复序列等DNA二级结构基因序列的大肠杆菌化学感受态。GT115菌株中存在一种SbcCD蛋白复合体,可以识别DNA发夹结构,并将其切除。将sbcC和sbcD···

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产品概述

产品描述

GT115感受态是一种专门用来克隆含有发夹结构(Hairpin)或重复序列等DNA二级结构基因序列的大肠杆菌化学感受态。GT115菌株中存在一种SbcCD蛋白复合体,可以识别DNA发夹结构,并将其切除。将sbcCsbcD两个基因的突变,增强了GT115感受态中发夹结构DNA的稳定性。同时在大肠杆菌基因组中引入uidA (∆MluI)::pir-116,使GT115可以表达π蛋白,并使得含有R6Kg ori复制子的质粒(pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA等)可以正常复制。rpsL赋予GT115链霉素抗性;recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。经pUC19质粒转化检测,GT115感受态细胞的转化效率可达108 cfu/μg DNA。

 

产品优势

✽ 高转化效率:>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 适合于含有R6Kg ori复制子的质粒(pCpG✽mcs、pCpG✽LacZ、pCpG✽siRNA等)正常复制

 

产品组分

组分

CC96176-01

CC96176-02

GT115化学感受态

10 × 100 μL

100 × 100 μL




基因型:F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZ∆M15∆lacX74 recA1 rpsL (StrR) endA1 ∆dcm uidA (∆Mlul)::pir-116 ∆sbcC-sbcD

 

产品应用

GT115感受态适合于含有R6Kg ori复制子的质粒(pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA等)可以正常复制。

 

实验流程

1. 解冻感受态细胞:从-80℃取感受态细胞,放置在冰浴或冰水浴中融化,约5-10 min,放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化:每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL,然后轻轻弹击管底约2-3次,立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作,避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。

3. 热激处理:将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养:加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基,颠倒数次混匀,37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板:如果用于质粒的转化扩增,建议直接取50-100 μL进行涂板即可;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议先5000 g,1 min室温离心沉淀细菌,吸除约900-950 μL上清,然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬,涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养:将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍,有利于形成单克隆。

 

保存条件

-80℃保存;请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

 

相关参数

感受态类型

化学感受态

感受态菌株名称

GT115

种属

大肠杆菌

转化效率

高效率 (>1x10^8 cfu/µg pUC19 DNA)

菌株用途

克隆

应用特征

适合于含有R6Kg ori复制子的质粒复制

是否可克隆甲基化DNA

是否可进行蓝白斑筛选

是 (培养基中需加入IPTG和X-gal)

菌株抗性

链霉素

培养基

LB

培养条件

37℃,有氧

诱导方法

-

保存条件

-80℃

运输条件

干冰

包装规格

管装 (100 µL/管)

出品公司

ToloBio



 常见问题解答


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