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克隆大肠杆菌感受态EPI400

类别:生物试剂

浏览:71

产品概述产品描述EPI400菌株来源于EC100菌株,将EC100核基因中可以提高质粒拷贝数的pcnB基因删除后插入一个诱导型启动子驱动的pcnB基因,从而构建成EPI100菌株。非诱导情况下,EPI400菌株中的质粒拷贝数低在加入Copy···

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产品概述

产品描述

EPI400菌株来源于EC100菌株,将EC100核基因中可以提高质粒拷贝数的pcnB基因删除后插入一个诱导型启动子驱动的pcnB基因,从而构建成EPI100菌株。非诱导情况下,EPI400菌株中的质粒拷贝数低在加入CopyMore 400诱导剂(#96002)后可将质粒的拷贝数提高至正常状态。EPI400菌株无诱导剂培养条件下质粒DNA的拷贝数量维持在极低的水平,但在诱导培养条件下可启动质粒的快速复制,短期获得高产量的质粒DNA,保证了稳定性差的质粒的完整性。因此,EPI400特别适合于各种含不稳定DNA的质粒或含有毒性基因的克隆。mcrA突变和mrr-hsdRMS-mcrBC缺失的基因型使得EPI400菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。recA1endA1突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15标记的存在使EPI400可用于蓝白斑筛选,tonA突变赋予其抗噬菌体T1和T5的能力,rpsL突变赋予其链霉素抗性。经pUC19质粒转化检测,EPI400感受态细胞的转化效率可达107 cfu/μg DNA。

 

产品优势

✽ 高转化效率:>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 适合于各种不稳定DNA或在常规菌株中得率偏低的质粒克隆

 

产品组分

组分

CC96177-01

CC96177-02

EPI400化学感受态

10 × 100 μL

100 × 100 μL




基因型::F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr*

 

产品应用

EPI400菌株适合于各种含不稳定DNA的质粒或含有毒性基因的克隆。

 

实验流程

1. 解冻感受态细胞:从-80℃取感受态细胞,放置在冰浴或冰水浴中融化,约5-10 min,放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化:每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL,然后轻轻弹击管底约2-3次,立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作,避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。

3. 热激处理:将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养:加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基,颠倒数次混匀,37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板:如果用于质粒的转化扩增,建议直接取50-100 μL进行涂板即可;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议先5000 g,1 min室温离心沉淀细菌,吸除约900-950 μL上清,然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬,涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养:将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍,有利于形成单克隆。

 

保存条件

-80℃保存;请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

 

相关参数

感受态类型

化学感受态

感受态菌株名称

EPI400

种属

大肠杆菌

转化效率

高效率 (>1x10^7 cfu/µg pUC19 DNA)

菌株用途

克隆

应用特征

适合于各种不稳定DNA或在常规菌株中得率偏低的质粒克隆

是否可克隆甲基化DNA

是否可进行蓝白斑筛选

菌株抗性

链霉素

培养基

LB

培养条件

37℃,有氧

诱导方法

CopyMore 400 (#96002)

保存条件

-80℃

运输条件

干冰

包装规格

管装 (100 µL/管)

出品公司

ToloBio



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