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克隆大肠杆菌感受态XL2-Blue

类别:生物试剂

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产品概述产品描述XL2-Blue菌株来源于XL1-Blue菌株,为Hte(high transformation efficiency)基因型。Hte是Stratagene开发的特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型,该基因型使得XL2-Blue适用于大质···

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产品概述

产品描述

XL2-Blue菌株来源于XL1-Blue菌株,为Hte(high transformation efficiency)基因型。Hte是Stratagene开发的特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型,该基因型使得XL2-Blue适用于大质粒DNA和重组产物的转化,降低片段大小的偏爱性,多用于文库构建,并已成功应用于40 kb质粒的构建。recA1endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。hsdSMR突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失,增强了外源DNA的稳定性和提取质量。由于携带lacZM15突变,该菌株可用于蓝、白斑筛选。此外,该菌株还携带四环素和氯霉素抗性。XL2-Blue感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率108 cfu/μg DNA。

 

产品优势

✽ 高转化效率:>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 适合于大质粒DNA和重组产物的转化,多用于文库构建

 

产品组分

组分

CC96188-01

CC96188-02

XL2-Blue化学感受态

10 × 100 μL

100 × 100 μL




基因型:TetR Δ(mcrA)183 Hte [F´ {proAB lacIq lacZΔM15 Tn10 (TetR) Amy CamR }] Δ(mcrCB hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 rel*A1

 

产品应用

XL2-Blue感受态适合于大质粒DNA和重组产物的转化,多用于文库构建。

 

实验流程

1. 解冻感受态细胞:从-80℃取感受态细胞,放置在冰浴或冰水浴中融化,约5-10 min,放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化:每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL,然后轻轻弹击管底约2-3次,立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作,避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。

3. 热激处理:将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养:加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基,颠倒数次混匀,37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板:如果用于质粒的转化扩增,建议直接取50-100 μL进行涂板即可;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议先5000 g,1 min室温离心沉淀细菌,吸除约900-950 μL上清,然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬,涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养:将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍,有利于形成单克隆。

 

保存条件

-80℃保存;请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

 

相关参数

感受态类型

化学感受态

感受态菌株名称

XL2-Blue

种属

大肠杆菌

转化效率

高效率 (>1x10^8 cfu/µg pUC19 DNA)

菌株用途

克隆

应用特征

适合于大质粒DNA和重组产物的转化,多用于文库构建

是否可克隆甲基化DNA

是否可进行蓝白斑筛选

菌株抗性

四环素;氯霉素

培养基

LB

培养条件

37℃,有氧

诱导方法

-

保存条件

-80℃

运输条件

干冰

包装规格

管装 (100 µL/管)

出品公司

ToloBio



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