产品概述

产品描述

DH10B T1感受态具有DH10B感受态的所有优点，并添加了对T1和T5噬菌体感染产生耐受性的tonA 基因型。tonA减少了因噬菌体污染的困扰。DH10B T1感受态能广泛应用于真核生物的基因组文库、cDNA文库构建、位点特异性突变等。mcrA、mcrBC及mrr突变使该感受态适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的真核生物DNA；recA1和endA1的突变使重组率降低，有利于插入DNA的稳定。φ80lacZ∆M15的存在使DH10B T1可用于蓝白斑筛选；rpsL赋予其链霉素抗性。该菌株的化学感受态效率不高，常使用电转化感受态；经pUC19质粒转化检测，DH10B T1化学感受态细胞的转化效率达107 cfu/μg DNA以上。

产品优势

✽ 高转化效率：>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 适合于真核生物的基因组文库、cDNA文库构建、位点特异性突变等

产品组分

基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZΔM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG tonA

产品应用

DH10B T1感受态适合于l真核生物的基因组文库、cDNA文库构建、位点特异性突变等。

实验流程

1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。

3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。

保存条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

相关参数

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